多杀巴斯德杆菌检测方法

发布日期: 2014-01-02 【关闭】

 

中华人民共和国国家标准

 

实验动物  多杀巴斯德杆菌检测方法  GB/T 14926.5-2001

Laboratory animalMethod for examination of Pasteurella multocida

 

1         范围

本标准规定了实验动物多杀巴斯德杆菌的检测方法。

本标准适用于豚鼠、地鼠和兔多杀巴斯德杆菌的检测。

 

2         引用标准

下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB/T 14926.422001 实验动物  细菌学检测  标本采集

GB/T 14926.432001 实验动物  细菌学检测  染色法、培养基和试剂

 

3         原理

多杀巴斯德杆菌为革兰阴性小杆菌,寄居于豚鼠、地鼠和家兔的上呼吸道,具有特定的生化反应,其菌体可与相应的免疫血清在玻片上产生肉眼可见的凝集反应,据此可对该菌进行分离培养和检测。

 

4         主要设备和材料

4.1    普通恒温培养箱。

4.2    生物显微镜。

 

5         培养基和试剂

5.1    血琼脂平皿。

5.2    双糖铁或三糖铁琼脂。

5.3    糖发酵培养基。

5.4    半固体琼脂。

5.5    DHL琼脂平皿。

5.6    尿素培养基。

5.7    蛋白胨水、靛基质试剂。

5.8    硝酸盐培养基。

5.9    西蒙氏枸橼酸盐培养基。

5.10 营养明胶。

5.11 氨基酸脱羧酶试验培养基。

5.12 氧化酶试剂。

5.13 过氧化氢酶试剂。

5.14 多杀巴斯德杆菌诊断血清。

 

6         检测程序

 

7         操作步骤

7.1    采样

采取呼吸道分泌物或病灶分泌物。

7.2    分离培养

将已接种的血琼脂平皿置(36±1)℃培养2448h

7.3    鉴定

7.3.1       菌落特征

多杀巴斯德杆菌在血琼脂平皿上形成1mm左右、光滑露滴样或灰白色、不溶血的菌落。

7.3.2       菌体特征

革兰阴性小杆菌,两端钝圆并浓染,新分离菌株可有荚膜,经人工培养后很快消失。

7.3.3       三糖铁或双糖铁培养基(36±1)℃培养1824h,斜面及底层产酸不产气,乙酸铅纸条法显示硫化氢阳性。

7.3.4       生化反应

葡萄糖、乳糖和麦芽糖阳性。尿素酶、鸟氨酸脱羧酶阳性,赖氨酸脱羧酶阳性。硝酸盐还原试验阳性、靛基质试验阳性。

7.3.5       西蒙氏柠檬酸盐试验阴性。氧化酶、过氧化氢酶阳性。不液化明胶。

7.3.6       纯培养物转种DHL培养基,(36±1)℃普通恒温培养箱培养2448h不生长;半固体培养基动力观察阴性。

7.3.7       多杀巴斯德杆菌、嗜肺巴斯德杆菌及支气管鲍特杆菌的鉴别见表1

1  多杀巴斯德杆菌、嗜肺巴斯德杆菌及支气管鲍特杆菌的鉴别表

 

支气管鲍特杆菌

多杀巴斯德杆菌

嗜肺巴斯德杆菌

DHL琼脂生长

+

-

-

血平皿溶血

+

-

-/+

动力

+

-

 

葡萄糖

-

+

+

蔗糖

-

+

+

靛基质

-

+

+/-

尿素

+

-

+

硫化氢(H2S

-

+

+

+:阳性;-:阴性;-/+:大多数菌株阴性;+/-:大多数菌株阳性。

7.3.8       血清玻片凝集试验阳性。

 

8         结果报告

凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告,不符合者作出阴性报告。

 

来源:节选自《实验动物标准汇编》

【收藏】 【打印】 【关闭】